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LEBBYAC

ÁCIDO VAINILLIN MANDELICO

PTFT  008
Rev. 00

Quality Assurance

Hoja Nº 1/1

MUESTRA:

Orina de 24 hs recogida sobre 10 ml de HCl 6N, previo régimen de tres días. La muestra debe estar a pH 3. No comer: bananas, tomates, cremas, tortas, helados, chocolate, cacao, cítricos, quesos y cualquier alimento que contenga vainillina. No tomar té, café ni mate. No ingerir aspirinas. Suspender toda medicación. Realizar la menor actividad física posible.

Medir el pH de la muestra, si no es ácido pedir nueva muestra.
Alicuota: Si el volumen es menor de 1000 ml: 0.4 %
                 Si el volumen es mayor de 1000 ml: 0.2 %
Testigo : Solución de AVM 1 mg/ml en HCl 0.01 N
Reactivos que se preparan en el día:
- Periodato de sodio 2 %: 100 mg en 5 ml de agua destilada.
- Metabisulfito de sodio 10 %: 500 mg en 5 ml de agua destilada
- Buffer fosfato pH 7.5: 8.4 ml de Na2PO4H 1/15 M + 1.6 ml de KPO4H2 1/15 M
TECNICA: TECNICA MODIFICADA
Dos testigos y desconocidos en tubos gordos con 3 g de ClNa.

1 gr de ClNa.

Testigo: 0.03 ml. Completar a 5.5 ml con agua destilada. 10 ul + 0.8 ml de agua.
Muestras: el volumen determinado, llevar a 5.5 ml con agua destilada 1 ml de orina + 0.8 ml de agua.
Agregar 0.5 ml de HCl 6 N. 170 ul de HCl 6 N.
Agregar 30 ml de acetato de etilo. 10 ml de acetato de etilo.
Agitar 5 minutos. Dejar decantar  
Pasar a otro tubo 25 ml de la capa superior (acetato de etilo) 8 ml de la capa superior.
Si la pipeta se moja con agua, no sirve.  
Agregar 1.5 ml de K2CO3 exactamente medidos. 0.5 ml de K2CO3.
Agitar 3 minutos. Decantar. Puede dejarse en la heladera hasta el día siguiente.  
Sin sifonar tomar 1 ml de la capa inferior de CO3K2, cuidando de no arrastrar nada de acetato. 0.4 ml de la capa inferior.
Agregar 0.1 ml de IO4Na al 2% 40 ul de IO4Na
Dejar 30 minutos a 50º C (47 - 53) con tapón.  
Enfriar bajo canilla.  
Agregar 0.1 ml de metabisulfito de sodio. 40 ul de metabisulfito
Agregar 0.3 ml de AcH 5 N. Agitar hasta que cese la efervescencia 120 ul de AcH.
Esperar unos minutos y agregar 0.6 ml de buffer fosfato pH 7.5 0.24 ml de buffer fosfato pH 7.5
Agregar 20 ml de tolueno. 8 ml de tolueno.
Agitar 5 minutos. Dejar decantar.  
Pasar 15 ml de la capa superior (Tolueno) a otro tubo. 7 ml de la capa superior.
Agregar 4 ml de CO3K2 1 M 2 ml de CO3K2.
Agitar 3 minutos. Centrifugar.  
Sifonar parcialmente la capa superior.  
Leer la capa inferior contra agua destilada a 360 nm  
CALCULOS:
DO desconocido x 30 x diuresis de 24 hs.
DO estándar x alicuota x 1000
DO desconocido x 0.01 x Vol. (ml)
DO estándar

VALORES DE REFERENCIA: 0 - 1 Año:       : 1.3 - 2.5 mg/24 hs.
                                                        1 - 12 Años: : 2.8 - 5.0 mg/24 hs.
                                                        Adultos:         : 1.2 - 9.0 mg/24 hs.
 
REACTIVOS:  IO4Na: 50 mg a 2.5 ml          Metabisulfito: 100 mg a 1 ml

 


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PREPARO: Rodolfo Miguel 15/02/93
REVISO: Stella Maris Scacchi 30/02/93
ACTUALIZO: Rodolfo Miguel 18/10/00